page_banner

Nyheter

Vanliga frågor om cellkultur

1. Om jag får ett rör med frusna celler, kan jag lägga det direkt i flytande kväve för förvaring?

I många fall kan celler som transporteras på torris (-80°C) sättas tillbaka i flytande kväve och sedan tinas snabbt efteråt.Cellviabiliteten kan dock minska efter sådan behandling.För vissa känsliga cellinjer kan detta göra cellåterställning svårare.Detta fenomen tros bero på en förändring i strukturen hos iskristallerna i cellerna som ett resultat av temperaturförändringen.Det rekommenderas därför att cellerna tinas och odlas så snart som möjligt efter mottagandet.Minska lagringstiden vid -80°C.Denna temperatur används endast för transport.

Vanliga frågor cellkultur 1
Vanliga frågor cellkultur 2
Vanliga frågor cellkultur 4
Vanliga frågor cellkultur 3

2. Vilka säkerhetsåtgärder bör vidtas när man tar bort celler från flytande kväve för återvinning?

Cellkryorör i flytande kväve som inte är helt förseglade och har flytande kväve som läcker in i sig kan orsaka en explosion om temperaturen i kryoröret stiger kraftigt vid upptining.Det rekommenderas därför att man använder skyddsglasögon och skyddshandskar när man tar bort celler från flytande kväve.För återupplivning ska frysröret skakas kontinuerligt i ett 37°C vattenbad för att helt tina fryslösningen inom 1-2 minuter.Torka sedan av rörets utsida med en alkoholservett, ta den sedan in i det ultrarena bordet och överför cellerna till ett centrifugrör med 10 ml odlingsmedium tillsatt, centrifugera vid 1000 rpm i 5-10 minuter, kassera supernatanten, tillsätt lämplig mängd odlingsmedium och inokulera odlingskolven och inkubera i en 5 % CO2-inkubator.

3. Varför ska celler lagras i ångfas i en tank med flytande kväve snarare än i flytande fas?

Celler lagrade i gasfasen av flytande kväve är mer benägna att återupplivas.Medan i flytande kvävefasen, om lyofiliseringsrören inte är ordentligt förseglade eller har läckor, kan direkt kontakt mellan cellerna och det flytande kvävet äventyra cellernas livsduglighet efter upptining.

4. För suspensionsceller, hur byter jag odlingsmediet?

Odling av suspensionsceller kan göras genom att helt enkelt tillsätta färskt medium (om utrymmet tillåter) eller genom att separera cellerna från det gamla mediet genom centrifugering (100 xg under 5 minuter) och därefter återsuspendera de utfällda cellerna i färskt medium.Men för de flesta suspensionscellinjer är det en bättre metod att helt enkelt lägga till medium.Oavsett vilket måste mediet förnyas innan cellerna når sin största mättnadstäthet.Cellernas mättnadstäthet varierar mellan 3 x 10 5 och 2 x 10 6 beroende på cellinjen och odlingsförhållandena (vila eller omrörning, syresättningsnivåer, etc.).Celler måste spädas ut till en lägre cellkoncentration för att möjliggöra tillräcklig återvinning av näringsämnen för att cellerna ska växa logaritmiskt.Om mediet helt enkelt byts ut utan att minska celltätheten kommer cellerna snabbt att tömma mediet och dö.Om cellerna späds ut under sin minsta densitet kommer de att gå in i en eftersläpningsfas och växa mycket långsamt eller dö.Varje suspensionscellinje har olika mättnadstäthet och passageintervall, så dagliga cellantal är sättet att övervaka suspensionscellinjer*.

5. Vilken är den rekommenderade CO2-nivån för cellodling?

Även om CO2-nivåerna i cellodlingssystem varierar från 0,03 % till 40 % (vanligtvis runt 0,03 % CO2 i atmosfären), är det mycket vanligt att ingen CO2 tillförs luften eller en CO2-koncentration på 5 % till 10 %.Det är viktigt att justera koncentrationen av natriumbikarbonat i mediet för att balansera med CO2-nivån i gasfasen.Celler producerar CO2 och kräver en liten mängd kolsyra för tillväxt och överlevnad.Om ingen CO2 tillsätts och cellerna förökar sig kan 4 mM (0,34 g/L) vattenfritt natriumbikarbonat användas.Dock bör locket på odlingskolven dras åt vid denna tidpunkt.Om odlingssystemet kräver 5 % eller 10 % CO2, använd 23,5 mM (1,97 g/L) respektive 47 mM (3,95 g/L) natriumbikarbonat vid 37°C, med ett initialt pH på cirka 7,6.Under dessa förhållanden bör kolven lämnas utan lock eller så bör en petriskål användas för att upprätthålla gasens jämvikt.

6. Varför behöver vissa celler natriumpyruvat?Hur mycket natriumpyruvat ska jag lägga till mediet?

Pyruvat är en organisk syrametabolit i den glykolytiska vägen* som lätt kommer in i och lämnar cellen.Därför ger tillsatsen av natriumpyruvat till mediet både en energikälla och en kolkälla för anabolism, hjälper till att bibehålla vissa specifika celler, hjälper till med cellkloning eller behövs när serumkoncentrationerna i mediet minskar.Natriumpyruvat hjälper också till att minska fluorescensinducerad cytotoxicitet.Natriumpyruvat tillsätts vanligtvis i en slutkoncentration av 1 mM.kommersiellt tillgängliga natriumpyruvatlösningar är vanligtvis 100 mM lagringslösning (100X).

Översatt med www.DeepL.com/Translator (gratisversion).


Posttid: 21 juni 2022